लामखुट्टे विरुद्ध वातावरणमैत्री लार्भानाशकको ​​रूपमा बन्दाकोपीको बीउको धूलो र यसको यौगिकहरूको जैविक गतिविधि

प्रभावकारी रूपमालामखुट्टे नियन्त्रण गर्नुहोस्र तिनीहरूले बोक्ने रोगहरूको घटना घटाउन, रासायनिक कीटनाशकहरूको रणनीतिक, दिगो र वातावरणमैत्री विकल्पहरू आवश्यक छन्। हामीले इजिप्टियन एडिस (L., 1762) को नियन्त्रणमा प्रयोगको लागि जैविक रूपमा निष्क्रिय ग्लुकोसिनोलेटहरूको इन्जाइमेटिक हाइड्रोलिसिसद्वारा उत्पादित बिरुवा-व्युत्पन्न आइसोथियोसाइनेट्सको स्रोतको रूपमा निश्चित ब्रासिकासी (परिवार ब्रासिका) बाट बीउ भोजनहरूको मूल्याङ्कन गर्यौं। पाँच-डिफ्याटेड बीउको खाना (ब्रासिका जुनसिया (एल) जर्न।, १८५९, लेपिडियम सेटिभम एल., १७५३, सिनापिस अल्बा एल., १७५३, थ्लास्पी आर्भेन्स एल., १७५३ र थ्लास्पी आर्भेन्स - तीन मुख्य प्रकारका थर्मल इनएक्टिभेसन र इन्जाइमेटिक डिग्रेडेसन रासायनिक उत्पादनहरू २४-घण्टाको एक्सपोजरमा एडिस एजिप्टी लार्भालाई एलाइल आइसोथियोसाइनेट, बेन्जिल आइसोथियोसाइनेट र ४-हाइड्रोक्सीबेन्जिलिसोथियोसाइनेटको विषाक्तता (LC50) निर्धारण गर्न = ०.०४ ग्राम/१२० मिली dH2O)। तोरी, सेतो तोरी र घोडाको पुच्छरको लागि LC50 मानहरू। एलाइल आइसोथियोसाइनेट (LC50 = 19.35 ppm) र 4 को तुलनामा बीउको खानेकुरा क्रमशः 0.05, 0.08 र 0.05 थियो। -हाइड्रोक्सीबेन्जाइलिसोथियोसाइनेट (LC50 = 55.41 ppm) उपचार पछि 24 घण्टा भित्र लार्भाको लागि क्रमशः 0.1 g/120 ml dH2O भन्दा बढी विषाक्त थियो। यी नतिजाहरू अल्फाल्फा बीउको खानेकुराको उत्पादनसँग मेल खान्छ। बेन्जिल एस्टरहरूको उच्च दक्षता गणना गरिएको LC50 मानहरूसँग मेल खान्छ। बीउको खानेकुरा प्रयोग गर्नाले लामखुट्टे नियन्त्रणको प्रभावकारी विधि प्रदान गर्न सकिन्छ। लामखुट्टे लार्भा विरुद्ध क्रुसिफेरस बीउको पाउडर र यसको मुख्य रासायनिक घटकहरूको प्रभावकारिता र क्रुसिफेरस बीउको पाउडरमा प्राकृतिक यौगिकहरूले लामखुट्टे नियन्त्रणको लागि कसरी आशाजनक वातावरणमैत्री लार्भासाइडको रूपमा काम गर्न सक्छन् भनेर देखाउँछ।
एडिस लामखुट्टेबाट हुने भेक्टर-जनित रोगहरू विश्वव्यापी जनस्वास्थ्य समस्याको रूपमा रहेको छ। लामखुट्टेबाट हुने रोगहरूको घटना भौगोलिक रूपमा फैलिन्छ1,2,3 र पुन: देखा पर्दछ, जसले गर्दा गम्भीर रोगहरूको प्रकोप हुन्छ4,5,6,7। मानिस र जनावरहरूमा रोगहरूको फैलावट (जस्तै, चिकनगुनिया, डेंगु, रिफ्ट भ्याली ज्वरो, पहेंलो ज्वरो र जिका भाइरस) अभूतपूर्व छ। डेंगु ज्वरोले मात्र उष्णकटिबंधीय क्षेत्रमा लगभग 3.6 अर्ब मानिसहरूलाई संक्रमणको जोखिममा पार्छ, अनुमानित 390 मिलियन संक्रमणहरू वार्षिक रूपमा हुन्छन्, जसको परिणामस्वरूप प्रति वर्ष 6,100-24,300 मृत्यु हुन्छ8। दक्षिण अमेरिकामा जिका भाइरसको पुनरावृत्ति र प्रकोपले संक्रमित महिलाहरूबाट जन्मेका बच्चाहरूमा हुने मस्तिष्क क्षतिको कारणले विश्वव्यापी ध्यान आकर्षित गरेको छ2। क्रेमर एट अल 3 ले भविष्यवाणी गरेका छन् कि एडिस लामखुट्टेको भौगोलिक दायरा विस्तार हुँदै जानेछ र 2050 सम्ममा, विश्वको आधा जनसंख्या लामखुट्टेबाट हुने आर्बोभाइरसबाट संक्रमणको जोखिममा हुनेछ।
डेंगु र पहेंलो ज्वरो विरुद्ध हालै विकसित गरिएका खोपहरू बाहेक, धेरैजसो लामखुट्टेबाट सर्ने रोगहरू विरुद्धको खोपहरू अझै विकास भएका छैनन्9,10,11। खोपहरू अझै पनि सीमित मात्रामा उपलब्ध छन् र क्लिनिकल परीक्षणहरूमा मात्र प्रयोग गरिन्छ। कृत्रिम कीटनाशकहरू प्रयोग गरेर लामखुट्टे वाहकहरूको नियन्त्रण लामखुट्टेबाट सर्ने रोगहरूको फैलावट नियन्त्रण गर्न एक प्रमुख रणनीति भएको छ12,13। यद्यपि कृत्रिम कीटनाशकहरू लामखुट्टे मार्न प्रभावकारी छन्, कृत्रिम कीटनाशकहरूको निरन्तर प्रयोगले गैर-लक्षित जीवहरूलाई नकारात्मक रूपमा असर गर्छ र वातावरण प्रदूषित गर्दछ14,15,16। रासायनिक कीटनाशकहरू प्रति लामखुट्टे प्रतिरोध बढ्दै जाने प्रवृत्ति अझ चिन्ताजनक छ17,18,19। कीटनाशकहरूसँग सम्बन्धित यी समस्याहरूले रोग वाहकहरूलाई नियन्त्रण गर्न प्रभावकारी र वातावरणमैत्री विकल्पहरूको खोजीलाई तीव्र बनाएको छ।
विभिन्न वनस्पतिहरूलाई कीट नियन्त्रणको लागि फाइटोपेस्टिसाइडको स्रोतको रूपमा विकास गरिएको छ20,21। वनस्पति पदार्थहरू सामान्यतया वातावरणमैत्री हुन्छन् किनभने तिनीहरू जैविक रूपमा विकसित हुन्छन् र स्तनधारी, माछा र उभयचर जस्ता गैर-लक्षित जीवहरूको लागि कम वा नगण्य विषाक्तता हुन्छन्20,22। जडीबुटी तयारीहरूले लामखुट्टेको विभिन्न जीवन चरणहरूलाई प्रभावकारी रूपमा नियन्त्रण गर्न विभिन्न कार्य संयन्त्रहरू सहित विभिन्न जैविक सक्रिय यौगिकहरू उत्पादन गर्न जानिन्छ23,24,25,26। आवश्यक तेलहरू र अन्य सक्रिय वनस्पति सामग्रीहरू जस्ता वनस्पति-व्युत्पन्न यौगिकहरूले ध्यान आकर्षित गरेका छन् र लामखुट्टे भेक्टरहरूलाई नियन्त्रण गर्न नवीन उपकरणहरूको लागि मार्ग प्रशस्त गरेका छन्। आवश्यक तेलहरू, मोनोटरपेन्स र सेस्क्विटरपेन्सले विकर्षक, खुवाउने निवारक र ओभिसाइडहरूको रूपमा काम गर्छन्27,28,29,30,31,32,33। धेरै वनस्पति तेलहरूले लामखुट्टेको लार्भा, प्युपा र वयस्कहरूको मृत्यु निम्त्याउँछन्34,35,36, स्नायु, श्वासप्रश्वास, अन्तःस्रावी र कीराहरूको अन्य महत्त्वपूर्ण प्रणालीहरूलाई असर गर्छ37।
हालैका अध्ययनहरूले तोरीको बोट र तिनीहरूको बीउलाई जैविक सक्रिय यौगिकहरूको स्रोतको रूपमा सम्भावित प्रयोगको बारेमा अन्तर्दृष्टि प्रदान गरेका छन्। तोरीको बीउको खानालाई बायोफ्युमिगेन्टको रूपमा परीक्षण गरिएको छ38,39,40,41 र झारपात दमनको लागि माटो संशोधनको रूपमा प्रयोग गरिएको छ42,43,44 र माटोबाट उत्पन्न बिरुवा रोगजनकहरूको नियन्त्रण45,46,47,48,49,50, बिरुवाको पोषण। नेमाटोडहरू 41,51, 52, 53, 54 र कीराहरू 55, 56, 57, 58, 59, 60। यी बीउ पाउडरहरूको फङ्गिसाइडल गतिविधि आइसोथियोसाइनेट्स भनिने बिरुवा सुरक्षात्मक यौगिकहरूलाई श्रेय दिइएको छ38,42,60। बिरुवाहरूमा, यी सुरक्षात्मक यौगिकहरू गैर-जैव सक्रिय ग्लुकोसिनोलेट्सको रूपमा बिरुवा कोषहरूमा भण्डारण गरिन्छ। यद्यपि, जब बिरुवाहरू कीराको खुवाउने वा रोगजनक संक्रमणबाट क्षतिग्रस्त हुन्छन्, ग्लुकोसिनोलेट्सलाई माइरोसिनेजद्वारा बायोएक्टिभ आइसोथियोसाइनेट्स55,61 मा हाइड्रोलाइज गरिन्छ। आइसोथियोसाइनेट्स वाष्पशील यौगिकहरू हुन् जसमा व्यापक-स्पेक्ट्रम एन्टिमाइक्रोबियल र कीटनाशक गतिविधि हुन्छ भनेर चिनिन्छ, र तिनीहरूको संरचना, जैविक गतिविधि र सामग्री ब्रासिकासी प्रजातिहरू बीच व्यापक रूपमा भिन्न हुन्छ42,59,62,63।
तोरीको दानाको पेटबाट प्राप्त आइसोथियोसाइनेटहरूमा कीटनाशक गतिविधि हुने थाहा भए तापनि, चिकित्सा रूपमा महत्त्वपूर्ण आर्थ्रोपड भेक्टरहरू विरुद्ध जैविक गतिविधिको डेटाको अभाव छ। हाम्रो अध्ययनले एडिस लामखुट्टे विरुद्ध चार डिफ्याटेड बीउ पाउडरहरूको लार्भिसिडल गतिविधिको जाँच गर्‍यो। एडिस एजिप्टाईको लार्भा। अध्ययनको उद्देश्य लामखुट्टे नियन्त्रणको लागि वातावरणमैत्री जैविक कीटनाशकको ​​रूपमा तिनीहरूको सम्भावित प्रयोगको मूल्याङ्कन गर्नु थियो। लामखुट्टेको लार्भामा यी रासायनिक घटकहरूको जैविक गतिविधि परीक्षण गर्न बीउ खाने तीन प्रमुख रासायनिक घटकहरू, एलाइल आइसोथियोसाइनेट (AITC), बेन्जिल आइसोथियोसाइनेट (BITC), र 4-हाइड्रोक्सीबेन्जिलिसोथियोसाइनेट (4-HBITC) पनि परीक्षण गरिएको थियो। लामखुट्टेको लार्भा विरुद्ध चार बन्दाकोबीको बीउ पाउडर र तिनीहरूको मुख्य रासायनिक घटकहरूको प्रभावकारिता मूल्याङ्कन गर्ने यो पहिलो रिपोर्ट हो।
एडिस एजिप्टाई (रकफेलर स्ट्रेन) को प्रयोगशाला उपनिवेशहरूलाई २६°C, ७०% सापेक्षिक आर्द्रता (RH) र १०:१४ घण्टा (L:D फोटोपिरियड) मा राखिएको थियो। मिलन गरिएका पोथीहरूलाई प्लास्टिकको पिंजडामा राखिएको थियो (उचाइ ११ सेमी र व्यास ९.५ सेमी) र साइट्रेटेड गोवाइन रगत प्रयोग गरेर बोतल खुवाउने प्रणाली मार्फत खुवाइएको थियो (हेमोस्ट्याट ल्याबोरेटरीज इंक, डिक्सन, CA, USA)। रगत खुवाउने काम सामान्य रूपमा झिल्ली बहु-ग्लास फिडर (केमग्लास, लाइफ साइन्सेस LLC, भिनल्याण्ड, NJ, USA) प्रयोग गरेर गरिएको थियो जुन ३७°C तापक्रम नियन्त्रण भएको घुमाउरो पानी बाथ ट्यूब (HAAKE S7, थर्मो-साइन्टिफिक, वाल्थम, MA, USA) मा जडान गरिएको थियो। प्रत्येक गिलास फिड चेम्बरको तल (क्षेत्रफल १५४ mm2) मा प्याराफिल्म M को फिल्म तन्काउनुहोस्। त्यसपछि प्रत्येक फिडरलाई मिलन गर्ने पोथी भएको पिंजडालाई ढाक्ने माथिल्लो ग्रिडमा राखिएको थियो। लगभग ३५०-४०० μl गाईवस्तुको रगत पाश्चर पिपेट (फिशरब्रान्ड, फिशर साइन्टिफिक, वाल्थम, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) प्रयोग गरेर गिलास फिडर फनेलमा थपियो र वयस्क किराहरूलाई कम्तिमा एक घण्टाको लागि पानी निकाल्न दिइयो। त्यसपछि गर्भवती महिलाहरूलाई १०% सुक्रोज घोल दिइयो र व्यक्तिगत अल्ट्रा-क्लियर सउफ्ले कप (१.२५ फ्लु औंस आकार, डार्ट कन्टेनर कर्पोरेशन, मेसन, एमआई, संयुक्त राज्य अमेरिका) मा राखिएको ओसिलो फिल्टर पेपरमा अण्डा राख्न अनुमति दिइयो। पानी भएको पिंजरामा। अण्डा भएको फिल्टर पेपरलाई सिल गरिएको झोला (एससी जोन्सन, रेसिन, WI) मा राख्नुहोस् र २६ डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गर्नुहोस्। अण्डाहरू कोरलिएका थिए र लगभग २००-२५० लार्भाहरू प्लास्टिक ट्रेमा हुर्काइएका थिए जसमा खरायो चाउ (जुप्रीम, प्रिमियम नेचुरल प्रोडक्ट्स, इंक, मिसन, केएस, संयुक्त राज्य अमेरिका) र कलेजो पाउडर (एमपी बायोमेडिकल, एलएलसी, सोलोन, ओएच, संयुक्त राज्य अमेरिका) र माछाको फिलेट (टेट्रामिन, टेट्रा जीएमपीएच, मीर, जर्मनी) को मिश्रण २:१:१ को अनुपातमा राखिएको थियो। हाम्रो जैव परीक्षणमा तेस्रो चरणको अन्तिम लार्भा प्रयोग गरिएको थियो।
यस अध्ययनमा प्रयोग गरिएको बिरुवाको बीउ सामग्री निम्न व्यावसायिक र सरकारी स्रोतहरूबाट प्राप्त गरिएको थियो: ब्रासिका जुनसिया (खैरो तोरी-प्यासिफिक गोल्ड) र ब्रासिका जुनसिया (सेतो तोरी-इडा गोल्ड) प्यासिफिक नर्थवेस्ट किसान सहकारी, वाशिंगटन राज्य, संयुक्त राज्य अमेरिकाबाट; (गार्डेन क्रेस) केली सीड एण्ड हार्डवेयर कम्पनी, पियोरिया, IL, संयुक्त राज्य अमेरिकाबाट र थ्लास्पी आर्भेन्स (फिल्ड पेनीक्रेस-एलिजाबेथ) USDA-ARS, पियोरिया, IL, संयुक्त राज्य अमेरिकाबाट; अध्ययनमा प्रयोग गरिएको कुनै पनि बीउलाई कीटनाशकले प्रशोधन गरिएको थिएन। यस अध्ययनमा सबै बीउ सामग्रीहरू स्थानीय र राष्ट्रिय नियमहरू अनुसार र सबै सान्दर्भिक स्थानीय राज्य र राष्ट्रिय नियमहरूको अनुपालनमा प्रशोधन र प्रयोग गरिएको थियो। यस अध्ययनले ट्रान्सजेनिक बिरुवा प्रजातिहरूको जाँच गरेन।
ब्रासिका जुनसिया (PG), अल्फाल्फा (Ls), सेतो तोरी (IG), थ्लास्पी आर्भेन्स (DFP) बीउहरूलाई ०.७५ मिमी जाल र स्टेनलेस स्टील रोटर, १२ दाँत, १०,००० आरपीएम (तालिका १) ले सुसज्जित Retsch ZM200 अल्ट्रासेन्ट्रिफ्यूगल मिल (Retsch, हान, जर्मनी) प्रयोग गरेर राम्रो पाउडरमा पिसेर राखियो। भुइँमा रहेको बीउको पाउडरलाई कागजको थिम्बलमा स्थानान्तरण गरियो र २४ घण्टाको लागि Soxhlet उपकरणमा हेक्सेनले डिफ्याट गरियो। डिफ्याट गरिएको फिल्ड तोरीको उपनमूनालाई माइरोसिनेजलाई डिनेचर गर्न र जैविक रूपमा सक्रिय आइसोथियोसाइनेट्स बनाउन ग्लुकोसिनोलेटहरूको हाइड्रोलिसिस रोक्नको लागि १०० डिग्री सेल्सियसमा १ घण्टाको लागि ताप उपचार गरिएको थियो। माइरोसिनेजलाई डिनेचर गरेर तातो-उपचार गरिएको हर्सटेल बीउ पाउडर (DFP-HT) नकारात्मक नियन्त्रणको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो।
पहिले प्रकाशित प्रोटोकल ६४ अनुसार उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफी (HPLC) प्रयोग गरेर डिफ्याटेड बीउको खानाको ग्लुकोसिनोलेट सामग्री तीन प्रतिलिपिमा निर्धारण गरिएको थियो। संक्षेपमा, डिफ्याटेड बीउको धुलोको २५० मिलीग्राम नमूनामा ३ एमएल मिथेनोल थपिएको थियो। प्रत्येक नमूनालाई ३० मिनेटको लागि पानीको नुहाउने ठाउँमा सोनिकेट गरिएको थियो र १६ घण्टाको लागि २३°C मा अँध्यारोमा छोडिएको थियो। त्यसपछि जैविक तहको १ एमएल एलिक्वोटलाई ०.४५ μm फिल्टर मार्फत अटोस्याम्पलरमा फिल्टर गरिएको थियो। शिमाडजु HPLC प्रणाली (दुई LC २०AD पम्पहरू; SIL २०A अटोस्याम्पलर; DGU २०As डिगासर; २३७ nm मा निगरानीको लागि SPD-२०A UV-VIS डिटेक्टर; र CBM-२०A सञ्चार बस मोड्युल) मा चलिरहेको, बीउको खानाको ग्लुकोसिनोलेट सामग्री तीन प्रतिलिपिमा निर्धारण गरिएको थियो। Shimadzu LC Solution सफ्टवेयर संस्करण १.२५ (Shimadzu Corporation, Columbia, MD, USA) प्रयोग गर्दै। स्तम्भ C18 Inertsil रिभर्स फेज स्तम्भ थियो (२५० मिमी × ४.६ मिमी; RP C-१८, ODS-३, ५u; GL Sciences, Torrance, CA, USA)। प्रारम्भिक मोबाइल चरण अवस्थाहरू पानीमा १२% मेथानोल/८८% ०.०१ M टेट्राब्युटिलामोनियम हाइड्रोक्साइड (TBAH; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) मा सेट गरिएको थियो जसको प्रवाह दर १ mL/मिनेट थियो। १५ μl नमूनाको इंजेक्शन पछि, प्रारम्भिक अवस्थाहरू २० मिनेटको लागि कायम राखिएको थियो, र त्यसपछि विलायक अनुपात १००% मेथानोलमा समायोजन गरिएको थियो, जसको कुल नमूना विश्लेषण समय ६५ मिनेट थियो। डिफ्याटेड बीउको खानामा सल्फर सामग्री अनुमान गर्न भर्खरै तयार पारिएको साइनापिन, ग्लुकोसिनोलेट र माइरोसिन मापदण्डहरू (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, MO, USA) को क्रमिक पातलोपनद्वारा एक मानक वक्र (nM/mAb आधारित) उत्पन्न गरिएको थियो। ग्लुकोसिनोलेटहरू। नमूनाहरूमा ग्लुकोसिनोलेट सांद्रतालाई Agilent 1100 HPLC (Agilent, Santa Clara, CA, USA) मा OpenLAB CDS ChemStation संस्करण (C.01.07 SR2 [255]) प्रयोग गरेर एउटै स्तम्भले सुसज्जित र पहिले वर्णन गरिएको विधि प्रयोग गरेर परीक्षण गरिएको थियो। ग्लुकोसिनोलेट सांद्रता निर्धारण गरिएको थियो; HPLC प्रणालीहरू बीच तुलनात्मक हुनुहोस्।
एलिल आइसोथियोसाइनेट (९४%, स्थिर) र बेन्जिल आइसोथियोसाइनेट (९८%) फिशर साइन्टिफिक (थर्मो फिशर साइन्टिफिक, वाल्थम, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) बाट खरिद गरिएको थियो। ४-हाइड्रोक्सीबेन्जिलिसोथियोसाइनेट केमक्रुज (सान्ता क्रुज बायोटेक्नोलोजी, CA, संयुक्त राज्य अमेरिका) बाट खरिद गरिएको थियो। माइरोसिनेजद्वारा इन्जाइमेटिक रूपमा हाइड्रोलाइज गर्दा, ग्लुकोसिनोलेट्स, ग्लुकोसिनोलेट्स र ग्लुकोसिनोलेट्स क्रमशः एलिल आइसोथियोसाइनेट, बेन्जिल आइसोथियोसाइनेट र ४-हाइड्रोक्सीबेन्जिलिसोथियोसाइनेट बनाउँछन्।
प्रयोगशाला जैव परीक्षणहरू Muturi et al. 32 को विधि अनुसार परिमार्जन सहित गरिएको थियो। अध्ययनमा पाँच कम बोसो भएका बीउ दानाहरू प्रयोग गरिएको थियो: DFP, DFP-HT, IG, PG र Ls। १२० mL डिआयोनाइज्ड पानी (dH2O) भएको ४०० mL डिस्पोजेबल तीन-तर्फी बीकर (VWR International, LLC, Radnor, PA, USA) मा बीस लार्भा राखिएको थियो। लामखुट्टेको लार्भा विषाक्तताको लागि सात बीउ खाने सांद्रता परीक्षण गरिएको थियो: ०.०१, ०.०२, ०.०४, ०.०६, ०.०८, ०.१ र ०.१२ ग्राम बीउ खाने/DFP बीउ खाने, DFP-HT, IG र PG को लागि १२० ml dH2O। प्रारम्भिक जैव परीक्षणहरूले संकेत गर्दछ कि डिफ्याटेड Ls बीउको पीठो परीक्षण गरिएका चार अन्य बीउ खाने भन्दा बढी विषाक्त छ। त्यसकारण, हामीले Ls बीउ भोजनको सात उपचार सांद्रतालाई निम्न सांद्रतामा समायोजन गर्यौं: ०.०१५, ०.०२५, ०.०३५, ०.०४५, ०.०५५, ०.०६५, र ०.०७५ ग्राम/१२० एमएल dH2O।
सामान्य कीरा मृत्युदरको मूल्याङ्कन गर्न उपचार नगरिएको नियन्त्रण समूह (dH20, कुनै बीउ खाना पूरक छैन) समावेश गरिएको थियो। प्रत्येक बीउ खानाको लागि विषाक्त जैव परीक्षणमा तीन प्रतिकृति तीन-ढलान बीकरहरू (प्रति बीकर २० लेट थर्ड इन्स्टार लार्भा) समावेश थिए, कुल १०८ शीशीहरूको लागि। उपचार गरिएका कन्टेनरहरूलाई कोठाको तापक्रम (२०-२१ डिग्री सेल्सियस) मा भण्डारण गरिएको थियो र उपचार सांद्रताको २४ र ७२ घण्टा निरन्तर सम्पर्कमा रहँदा लार्भा मृत्युदर रेकर्ड गरिएको थियो। यदि लार्भाको शरीर र उपांगहरू पातलो स्टेनलेस स्टील स्प्याटुलाले छेड्दा वा छोएपछि चल्दैनन् भने, लार्भाको लार्भालाई मृत मानिन्छ। मृत लार्भा सामान्यतया कन्टेनरको तल वा पानीको सतहमा पृष्ठीय वा भेन्ट्रल स्थितिमा गतिहीन रहन्छ। लार्भाका विभिन्न समूहहरू प्रयोग गरेर प्रयोग फरक-फरक दिनमा तीन पटक दोहोर्याइएको थियो, प्रत्येक उपचार सांद्रताको सम्पर्कमा कुल १८० लार्भाको लागि।
लामखुट्टेको लार्भामा AITC, BITC, र 4-HBITC को विषाक्तता एउटै बायोअसे प्रक्रिया प्रयोग गरेर तर फरक उपचारहरू प्रयोग गरेर मूल्याङ्कन गरिएको थियो। २-मिली सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबमा ९०० μL निरपेक्ष इथेनॉलमा १०० μL रसायन थपेर र राम्ररी मिसाउन ३० सेकेन्डसम्म हल्लाएर प्रत्येक रसायनको लागि १००,००० ppm स्टक समाधान तयार गर्नुहोस्। उपचार सांद्रता हाम्रो प्रारम्भिक बायोअसेको आधारमा निर्धारण गरिएको थियो, जसले BITC लाई AITC र 4-HBITC भन्दा धेरै विषाक्त पाएको थियो। विषाक्तता निर्धारण गर्न, BITC को ५ सांद्रता (१, ३, ६, ९ र १२ ppm), AITC को ७ सांद्रता (५, १०, १५, २०, २५, ३० र ३५ ppm) र ४-HBITC को ६ सांद्रता (१५, १५, २०, २५, ३० र ३५ ppm)। ३०, ४५, ६०, ७५ र ९० पीपीएम)। नियन्त्रण उपचारमा १०८ μL निरपेक्ष इथेनॉलको इन्जेक्सन गरिएको थियो, जुन रासायनिक उपचारको अधिकतम मात्रा बराबर हो। माथिको रूपमा बायोएसेहरू दोहोर्याइएको थियो, प्रति उपचार सांद्रतामा कुल १८० लार्भाहरू पर्दाफास गरियो। २४ घण्टा निरन्तर एक्सपोजर पछि AITC, BITC, र ४-HBITC को प्रत्येक सांद्रताको लागि लार्भा मृत्युदर रेकर्ड गरिएको थियो।
लग-रूपान्तरित एकाग्रता र खुराक-मृत्युदर वक्रहरूको लागि घातक खुराक अनुपातको लागि विश्वास अन्तरालहरूमा आधारित ५०% घातक सांद्रता (LC50), ९०% घातक सांद्रता (LC90), ढलान, घातक खुराक गुणांक, र ९५% घातक सांद्रता गणना गर्न पोलो सफ्टवेयर (पोलो प्लस, लेओरा सफ्टवेयर, संस्करण १.०) प्रयोग गरेर ६५ खुराक-सम्बन्धित मृत्युदर डेटाको प्रोबिट विश्लेषण गरिएको थियो। मृत्युदर डेटा प्रत्येक उपचार एकाग्रताको सम्पर्कमा आएका १८० लार्भाको संयुक्त प्रतिकृति डेटामा आधारित छ। प्रत्येक बीउ खाना र प्रत्येक रासायनिक घटकको लागि सम्भाव्य विश्लेषणहरू छुट्टाछुट्टै गरिएको थियो। घातक खुराक अनुपातको ९५% विश्वास अन्तरालको आधारमा, लामखुट्टेको लार्भामा बीउ खाना र रासायनिक घटकहरूको विषाक्तता उल्लेखनीय रूपमा फरक मानिएको थियो, त्यसैले १ को मान भएको विश्वास अन्तराल उल्लेखनीय रूपमा फरक थिएन, P = ०.०५६६।
डिफ्याटेड बीउको पीठो DFP, IG, PG र Ls मा प्रमुख ग्लुकोसिनोलेटहरूको निर्धारणको लागि HPLC नतिजाहरू तालिका १ मा सूचीबद्ध छन्। परीक्षण गरिएको बीउको पीठोमा प्रमुख ग्लुकोसिनोलेटहरू DFP र PG बाहेक फरक थिए, जसमा दुवैमा माइरोसिनेज ग्लुकोसिनोलेटहरू थिए। PG मा माइरोसिनिन सामग्री DFP भन्दा बढी थियो, क्रमशः ३३.३ ± १.५ र २६.५ ± ०.९ mg/g। Ls बीउको पाउडरमा ३६.६ ± १.२ mg/g ग्लुकोग्लाइकोन थियो, जबकि IG बीउको पाउडरमा ३८.० ± ०.५ mg/g साइनापिन थियो।
डिफ्याटेड बीउ मिलले उपचार गर्दा Ae. Aedes aegypti लामखुट्टेको लार्भा मारियो, यद्यपि उपचारको प्रभावकारिता बोटबिरुवाको प्रजाति अनुसार फरक थियो। २४ र ७२ घण्टाको सम्पर्क पछि DFP-NT मात्र लामखुट्टेको लार्भाको लागि विषाक्त थिएन (तालिका २)। सक्रिय बीउ पाउडरको विषाक्तता बढ्दो सांद्रतासँगै बढ्यो (चित्र १A, B)। २४-घण्टा र ७२-घण्टा मूल्याङ्कनमा LC50 मानहरूको घातक खुराक अनुपातको ९५% CI को आधारमा लामखुट्टेको लार्भाको लागि बीउ मिलको विषाक्तता उल्लेखनीय रूपमा भिन्न भयो (तालिका ३)। २४ घण्टा पछि, Ls बीउ मिलको विषाक्त प्रभाव अन्य बीउ मिल उपचारहरू भन्दा बढी थियो, उच्चतम गतिविधि र लार्भाको लागि अधिकतम विषाक्तता (LC50 = 0.04 g/120 ml dH2O)। IG, Ls र PG बीउ पाउडर उपचारको तुलनामा २४ घण्टामा लार्भाहरू DFP प्रति कम संवेदनशील थिए, जसको LC50 मान क्रमशः 0.115, 0.04 र 0.08 g/120 ml dH2O थियो, जुन LC50 मान भन्दा सांख्यिकीय रूपमा बढी थियो। 0.211 g/120 ml dH2O (तालिका ३)। DFP, IG, PG र Ls को LC90 मानहरू क्रमशः 0.376, 0.275, 0.137 र 0.074 g/120 ml dH2O थिए (तालिका २)। DPP को उच्चतम सांद्रता 0.12 g/120 ml dH2O थियो। २४ घण्टाको मूल्याङ्कन पछि, औसत लार्भा मृत्युदर केवल १२% थियो, जबकि IG र PG लार्भाको औसत मृत्युदर क्रमशः ५१% र ८२% पुग्यो। २४ घण्टाको मूल्याङ्कन पछि, Ls बीउ खाना उपचारको उच्चतम सांद्रता (०.०७५ ग्राम/१२० मिली dH2O) को लागि औसत लार्भा मृत्युदर ९९% थियो (चित्र १A)।
मृत्युदर वक्रहरू Ae. इजिप्टियन लार्भा (तेस्रो इन्स्टार लार्भा) को खुराक प्रतिक्रिया (प्रोबिट) बाट उपचार पछि २४ घण्टा (A) र ७२ घण्टा (B) मा बीउ खानाको सांद्रता सम्म अनुमान गरिएको थियो। डटेड लाइनले बीउ खाना उपचारको LC50 लाई प्रतिनिधित्व गर्दछ। DFP Thlaspi arvense, DFP-HT ताप निष्क्रिय Thlaspi arvense, IG Sinapsis alba (Ida Gold), PG Brassica juncea (Pacific Gold), Ls Lepidium sativum।
७२-घण्टाको मूल्याङ्कनमा, DFP, IG र PG बीउ खानाको LC50 मानहरू क्रमशः ०.१११, ०.०८५ र ०.०५१ g/१२० ml dH2O थिए। Ls बीउ खानाको सम्पर्कमा आएका लगभग सबै लार्भाहरू ७२ घण्टाको सम्पर्क पछि मरे, त्यसैले मृत्युदर डेटा प्रोबिट विश्लेषणसँग असंगत थियो। अन्य बीउ खानाको तुलनामा, लार्भाहरू DFP बीउ खाना उपचारको लागि कम संवेदनशील थिए र तथ्याङ्कीय रूपमा उच्च LC50 मानहरू थिए (तालिका २ र ३)। ७२ घण्टा पछि, DFP, IG र PG बीउ खाना उपचारको लागि LC50 मानहरू क्रमशः ०.१११, ०.०८५ र ०.०५ g/१२० ml dH2O अनुमान गरिएको थियो। ७२ घण्टाको मूल्याङ्कन पछि, DFP, IG र PG बीज पाउडरको LC90 मान क्रमशः ०.२१५, ०.२५४ र ०.१३८ g/१२० ml dH2O थियो। ७२ घण्टाको मूल्याङ्कन पछि, ०.१२ g/१२० ml dH2O को अधिकतम सांद्रतामा DFP, IG र PG बीज भोजन उपचारको लागि औसत लार्भा मृत्युदर क्रमशः ५८%, ६६% र ९६% थियो (चित्र १B)। ७२ घण्टाको मूल्याङ्कन पछि, PG बीज भोजन IG र DFP बीज भोजन भन्दा बढी विषाक्त पाइयो।
सिंथेटिक आइसोथियोसाइनेट्स, एलाइल आइसोथियोसाइनेट (AITC), बेन्जिल आइसोथियोसाइनेट (BITC) र ४-हाइड्रोक्सीबेन्जिलिसोथियोसाइनेट (४-HBITC) ले लामखुट्टेको लार्भालाई प्रभावकारी रूपमा मार्न सक्छन्। उपचार पछि २४ घण्टामा, BITC लार्भाको लागि बढी विषाक्त थियो जसको LC50 मान ५.२९ ppm थियो जबकि AITC को लागि १९.३५ ppm र ४-HBITC को लागि ५५.४१ ppm थियो (तालिका ४)। AITC र BITC को तुलनामा, ४-HBITC मा कम विषाक्तता र उच्च LC50 मान छ। सबैभन्दा शक्तिशाली बीउ खानामा दुई प्रमुख आइसोथियोसाइनेट्स (Ls र PG) को लामखुट्टेको लार्भा विषाक्ततामा महत्त्वपूर्ण भिन्नताहरू छन्। AITC, BITC, र 4-HBITC बीचको LC50 मानहरूको घातक खुराक अनुपातमा आधारित विषाक्तताले सांख्यिकीय भिन्नता देखायो कि LC50 घातक खुराक अनुपातको 95% CI मा 1 को मान समावेश थिएन (P = 0.05, तालिका 4)। BITC र AITC दुवैको उच्चतम सांद्रताले परीक्षण गरिएका लार्भाको 100% मार्न अनुमान गरिएको थियो (चित्र 2)।
उपचारको २४ घण्टा पछि, इजिप्टियन लार्भा (तेस्रो इन्स्टार लार्भा) सिंथेटिक आइसोथियोसाइनेट सांद्रतामा पुगेको Ae को खुराक प्रतिक्रिया (प्रोबिट) बाट मृत्युदर वक्र अनुमान गरिएको थियो। डटेड लाइनले आइसोथियोसाइनेट उपचारको लागि LC50 लाई प्रतिनिधित्व गर्दछ। बेन्जिल आइसोथियोसाइनेट BITC, एलाइल आइसोथियोसाइनेट AITC र 4-HBITC।
लामखुट्टे भेक्टर नियन्त्रण एजेन्टको रूपमा वनस्पति जैविक कीटनाशकहरूको प्रयोग लामो समयदेखि अध्ययन गरिएको छ। धेरै बोटबिरुवाहरूले कीटनाशक गतिविधि भएका प्राकृतिक रसायनहरू उत्पादन गर्छन्। तिनीहरूका जैविक सक्रिय यौगिकहरूले लामखुट्टे लगायत कीटहरू नियन्त्रण गर्न ठूलो सम्भावना भएको कृत्रिम कीटनाशकहरूको आकर्षक विकल्प प्रदान गर्दछ।
तोरीको बोटलाई बीउको लागि बालीका रूपमा उब्जाउ गरिन्छ, मसला र तेलको स्रोतको रूपमा प्रयोग गरिन्छ। जब तोरीको तेल बीउबाट निकालिन्छ वा जैविक इन्धनको रूपमा प्रयोगको लागि तोरी निकालिन्छ, 69 उप-उत्पादन डिफ्याटेड बीउ मिल हो। यो बीउ मिलले यसको धेरै प्राकृतिक जैव रासायनिक घटकहरू र हाइड्रोलाइटिक इन्जाइमहरू राख्छ। यो बीउ मिलको विषाक्तता आइसोथियोसाइनेट्सको उत्पादनलाई श्रेय दिइएको छ55,60,61। बीउ मिलको हाइड्रेशनको समयमा इन्जाइम माइरोसिनेज द्वारा ग्लुकोसिनोलेटको हाइड्रोलिसिस द्वारा आइसोथियोसाइनेट्स बनाइन्छ38,55,70 र फङ्गिसाइडल, ब्याक्टेरिसाइडल, नेमाटिसाइडल र कीटनाशक प्रभावहरू, साथै रासायनिक संवेदी प्रभावहरू र केमोथेराप्यूटिक गुणहरू सहित अन्य गुणहरू भएको जानिन्छ61,62,70। धेरै अध्ययनहरूले देखाएको छ कि तोरीको बोट र बीउ मिलले माटो र भण्डारण गरिएको खाद्य कीटहरू विरुद्ध प्रभावकारी रूपमा फ्युमिगेन्टको रूपमा काम गर्दछ57,59,71,72। यस अध्ययनमा, हामीले चार-बीउको खाना र यसका तीन जैविक रूपमा सक्रिय उत्पादनहरू AITC, BITC, र 4-HBITC को एडिस लामखुट्टेको लार्भामा विषाक्तताको मूल्याङ्कन गर्यौं। एडिस एजिप्टी। लामखुट्टेको लार्भा भएको पानीमा सिधै बीउको खाना थप्दा इन्जाइम्याटिक प्रक्रियाहरू सक्रिय हुने अपेक्षा गरिएको छ जसले लामखुट्टेको लार्भाको लागि विषाक्त आइसोथियोसाइनेटहरू उत्पादन गर्दछ। यो बायोट्रान्सफर्मेसन आंशिक रूपमा बीउको खानाको लार्भासिडल गतिविधि र प्रयोग गर्नु अघि बौना तोरीको बीउको खानालाई ताप उपचार गर्दा कीटनाशक गतिविधिको हानि द्वारा प्रदर्शन गरिएको थियो। ताप उपचारले ग्लुकोसिनोलेटहरू सक्रिय गर्ने हाइड्रोलाइटिक इन्जाइमहरू नष्ट गर्ने अपेक्षा गरिएको छ, जसले गर्दा जैविक रूपमा सक्रिय आइसोथियोसाइनेटहरूको गठन रोकिन्छ। जलीय वातावरणमा लामखुट्टे विरुद्ध बन्दाको बीउको पाउडरको कीटनाशक गुणहरू पुष्टि गर्ने यो पहिलो अध्ययन हो।
परीक्षण गरिएका बीउ पाउडरहरू मध्ये, वाटरक्रेस बीउ पाउडर (Ls) सबैभन्दा विषाक्त थियो, जसले एडिस एल्बोपिक्टसको उच्च मृत्युदर निम्त्यायो। एडिस एजिप्टी लार्भालाई २४ घण्टासम्म निरन्तर प्रशोधन गरियो। बाँकी तीन बीउ पाउडरहरू (PG, IG र DFP) मा ढिलो गतिविधि थियो र ७२ घण्टाको निरन्तर उपचार पछि पनि उल्लेखनीय मृत्युदर निम्त्यायो। केवल Ls बीउको खानामा ग्लुकोसिनोलेटहरूको उल्लेखनीय मात्रा थियो, जबकि PG र DFP मा माइरोसिनेज थियो र IG मा प्रमुख ग्लुकोसिनोलेटको रूपमा ग्लुकोसिनोलेट थियो (तालिका १)। ग्लुकोट्रोपाओलिनलाई BITC मा हाइड्रोलाइज गरिएको छ र सिनाल्बाइनलाई 4-HBITC61,62 मा हाइड्रोलाइज गरिएको छ। हाम्रो बायोएसे नतिजाहरूले संकेत गर्दछ कि Ls बीउको खाना र सिंथेटिक BITC दुवै लामखुट्टेको लार्भाको लागि अत्यधिक विषाक्त छन्। PG र DFP बीउको खानाको मुख्य घटक माइरोसिनेज ग्लुकोसिनोलेट हो, जुन AITC मा हाइड्रोलाइज गरिएको छ। AITC १९.३५ ppm को LC50 मानको साथ लामखुट्टेको लार्भा मार्न प्रभावकारी छ। AITC र BITC को तुलनामा, 4-HBITC आइसोथियोसाइनेट लार्भाको लागि सबैभन्दा कम विषाक्त हुन्छ। यद्यपि AITC BITC भन्दा कम विषाक्त छ, तिनीहरूको LC50 मानहरू लामखुट्टेको लार्भामा परीक्षण गरिएका धेरै आवश्यक तेलहरू भन्दा कम छन्32,73,74,75।
लामखुट्टेको लार्भा विरुद्ध प्रयोगको लागि हाम्रो क्रुसिफेरस बीउ पाउडरमा एउटा प्रमुख ग्लुकोसिनोलेट हुन्छ, जुन HPLC द्वारा निर्धारण गरिएको कुल ग्लुकोसिनोलेटको ९८-९९% भन्दा बढी हुन्छ। अन्य ग्लुकोसिनोलेटहरूको ट्रेस मात्रा पत्ता लगाइयो, तर तिनीहरूको स्तर कुल ग्लुकोसिनोलेटको ०.३% भन्दा कम थियो। वाटरक्रेस (L. sativum) बीउ पाउडरमा माध्यमिक ग्लुकोसिनोलेट (sinigrin) हुन्छ, तर तिनीहरूको अनुपात कुल ग्लुकोसिनोलेटको १% हो, र तिनीहरूको सामग्री अझै पनि नगण्य छ (लगभग ०.४ mg/g बीउ पाउडर)। यद्यपि PG र DFP मा एउटै मुख्य ग्लुकोसिनोलेट (माइरोसिन) हुन्छ, तिनीहरूको बीउ खानाको लार्भिसिडल गतिविधि तिनीहरूको LC50 मानहरूको कारणले गर्दा उल्लेखनीय रूपमा फरक हुन्छ। पाउडर फफूंदीमा विषाक्ततामा भिन्नता हुन्छ। एडिस एजिप्टी लार्भाको उदय माइरोसिनेज गतिविधि वा दुई बीउ फिडहरू बीचको स्थिरतामा भिन्नताको कारण हुन सक्छ। ब्रासिकासी बिरुवाहरूमा आइसोथियोसाइनेट्स जस्ता हाइड्रोलिसिस उत्पादनहरूको जैवउपलब्धतामा माइरोसिनेज गतिविधिले महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छ। पोकक एट अल.७७ र विल्किन्सन एट अल.७८ द्वारा अघिल्ला रिपोर्टहरूले देखाएको छ कि माइरोसिनेज गतिविधि र स्थिरतामा परिवर्तनहरू आनुवंशिक र वातावरणीय कारकहरूसँग पनि सम्बन्धित हुन सक्छन्।
अपेक्षित बायोएक्टिभ आइसोथियोसाइनेट सामग्री प्रत्येक बीउ खानाको LC50 मानहरूको आधारमा २४ र ७२ घण्टा (तालिका ५) मा सम्बन्धित रासायनिक अनुप्रयोगहरूसँग तुलना गर्न गणना गरिएको थियो। २४ घण्टा पछि, बीउ खानामा आइसोथियोसाइनेटहरू शुद्ध यौगिकहरू भन्दा बढी विषाक्त थिए। आइसोथियोसाइनेट बीउ उपचारको प्रति मिलियन (ppm) भागहरूको आधारमा गणना गरिएको LC50 मानहरू BITC, AITC, र 4-HBITC अनुप्रयोगहरूको लागि LC50 मानहरू भन्दा कम थिए। हामीले लार्भाले बीउ खाना गोलीहरू खाएको अवलोकन गर्यौं (चित्र 3A)। फलस्वरूप, लार्भाले बीउ खाना गोलीहरू खाएर विषाक्त आइसोथियोसाइनेटहरूको बढी केन्द्रित जोखिम प्राप्त गर्न सक्छ। यो २४-घण्टा एक्सपोजरमा IG र PG बीउ खाना उपचारहरूमा सबैभन्दा स्पष्ट थियो, जहाँ LC50 सांद्रता क्रमशः शुद्ध AITC र 4-HBITC उपचारहरू भन्दा 75% र 72% कम थियो। Ls र DFP उपचारहरू शुद्ध आइसोथियोसाइनेट भन्दा बढी विषाक्त थिए, जसमा LC50 मानहरू क्रमशः २४% र ४१% कम थिए। नियन्त्रण उपचारमा लार्भाहरू सफलतापूर्वक प्युपेट भए (चित्र ३B), जबकि बीउ खाना उपचारमा धेरैजसो लार्भाहरू प्युपेट भएनन् र लार्भा विकासमा उल्लेखनीय ढिलाइ भयो (चित्र ३B,D)। स्पोडोप्टेरालिटुरामा, आइसोथियोसाइनेटहरू वृद्धि मंदता र विकास ढिलाइसँग सम्बन्धित छन्।
Ae. Aedes aegypti लामखुट्टेको लार्भालाई २४-७२ घण्टासम्म ब्रासिका बीउको धुलोको सम्पर्कमा लगातार राखिएको थियो। (A) मुखका भागहरूमा बीउको खानाको कणहरू भएको मृत लार्भा (गोलाकार); (B) नियन्त्रण उपचार (थपिएको बीउको खाना बिना dH20) ले लार्भा सामान्य रूपमा बढ्छ र ७२ घण्टा पछि प्युपेट हुन थाल्छ भनेर देखाउँछ (C, D) बीउको खानाले उपचार गरिएको लार्भा; बीउको खानाले विकासमा भिन्नता देखायो र प्युपेट भएन।
हामीले लामखुट्टेको लार्भामा आइसोथियोसाइनेटको विषाक्त प्रभावको संयन्त्रको अध्ययन गरेका छैनौं। यद्यपि, रातो आगो कमिला (सोलेनोप्सिस इन्भिक्टा) मा गरिएको अघिल्लो अध्ययनहरूले देखाएको छ कि ग्लुटाथियोन एस-ट्रान्सफरेज (GST) र एस्टेरेज (EST) को निषेध आइसोथियोसाइनेट जैविक सक्रियताको मुख्य संयन्त्र हो, र AITC, कम गतिविधिमा पनि, GST गतिविधिलाई रोक्न सक्छ। कम सांद्रतामा रातो आयातित आगो कमिलाहरू। खुराक ०.५ µg/ml८० छ। यसको विपरीत, AITC ले वयस्क मकैको भुंगा (साइटोफिलस जेमाइस)८१ मा एसिटाइलकोलिनेस्टेरेजलाई रोक्छ। लामखुट्टेको लार्भामा आइसोथियोसाइनेट गतिविधिको संयन्त्रलाई स्पष्ट पार्न यस्तै अध्ययनहरू गरिनुपर्छ।
हामी तोरीको बीउको खानाद्वारा लामखुट्टेको लार्भा नियन्त्रणको लागि बिरुवाको ग्लुकोसिनोलेटको हाइड्रोलिसिस प्रतिक्रियाशील आइसोथियोसाइनेट्स बनाउनको लागि एक संयन्त्रको रूपमा काम गर्ने प्रस्तावलाई समर्थन गर्न ताप-निष्क्रिय DFP उपचार प्रयोग गर्छौं। परीक्षण गरिएको प्रयोग दरमा DFP-HT बीउको खाना विषाक्त थिएन। Lafarga et al. 82 ले रिपोर्ट गरे कि ग्लुकोसिनोलेटहरू उच्च तापक्रममा क्षयको लागि संवेदनशील हुन्छन्। ताप उपचारले बीउको खानामा माइरोसिनेज इन्जाइमलाई विकृत गर्ने र ग्लुकोसिनोलेटहरूको हाइड्रोलिसिसलाई प्रतिक्रियाशील आइसोथियोसाइनेट्स बनाउनबाट रोक्ने अपेक्षा गरिएको छ। यो Okunade et al. 75 द्वारा पनि पुष्टि गरिएको थियो। 75 ले देखाएको छ कि माइरोसिनेज तापमान संवेदनशील छ, देखाएको छ कि तोरी, कालो तोरी, र ब्लडरुट बीउहरू 80° सेल्सियस भन्दा माथिको तापक्रममा पर्दा माइरोसिनेज गतिविधि पूर्ण रूपमा निष्क्रिय भएको थियो। यी संयन्त्रहरूले ताप-उपचार गरिएको DFP बीउको खानाको कीटनाशक गतिविधि गुमाउन सक्छ।
तसर्थ, तोरीको बीउको खाना र यसका तीन प्रमुख आइसोथियोसाइनेट्स लामखुट्टेको लार्भाका लागि विषाक्त छन्। बीउको खाना र रासायनिक उपचारहरू बीचको यी भिन्नताहरूलाई ध्यानमा राख्दै, बीउको खानाको प्रयोग लामखुट्टे नियन्त्रणको प्रभावकारी विधि हुन सक्छ। बीउको पाउडरको प्रयोगको प्रभावकारिता र स्थिरता सुधार गर्न उपयुक्त सूत्रहरू र प्रभावकारी वितरण प्रणालीहरू पहिचान गर्न आवश्यक छ। हाम्रा नतिजाहरूले सिंथेटिक कीटनाशकहरूको विकल्पको रूपमा तोरीको बीउको खानाको सम्भावित प्रयोगलाई संकेत गर्दछ। यो प्रविधि लामखुट्टे भेक्टरहरूलाई नियन्त्रण गर्न एक नवीन उपकरण बन्न सक्छ। लामखुट्टेको लार्भा जलीय वातावरणमा फस्टाउँछ र बीउको खाना ग्लुकोसिनोलेटहरू हाइड्रेशनमा एन्जाइमेटिक रूपमा सक्रिय आइसोथियोसाइनेट्समा रूपान्तरण हुन्छन्, लामखुट्टे प्रभावित पानीमा तोरीको बीउको खानाको प्रयोगले महत्त्वपूर्ण नियन्त्रण क्षमता प्रदान गर्दछ। आइसोथियोसाइनेट्सको लार्भिसिडल गतिविधि फरक भए तापनि (BITC > AITC > 4-HBITC), धेरै ग्लुको साइनोलेटहरूसँग बीउको खाना संयोजन गर्दा synergistically विषाक्तता बढ्छ कि भनेर निर्धारण गर्न थप अनुसन्धान आवश्यक छ। डिफ्याटेड क्रुसिफेरस बीउको खाना र तीन बायोएक्टिभ आइसोथियोसाइनेट्सको लामखुट्टेमा कीटनाशक प्रभावहरू प्रदर्शन गर्ने यो पहिलो अध्ययन हो। यस अध्ययनको नतिजाले बीउबाट तेल निकाल्ने उप-उत्पादन, डिफ्याटेड बन्दाकोपीको बीउको खाना, लामखुट्टे नियन्त्रणको लागि एक आशाजनक लार्भिसिडल एजेन्टको रूपमा काम गर्न सक्छ भनेर देखाएर नयाँ जग बसाल्छ। यो जानकारीले बिरुवाको जैविक नियन्त्रण एजेन्टहरूको खोज र सस्तो, व्यावहारिक र वातावरणमैत्री जैविक कीटनाशकको ​​रूपमा तिनीहरूको विकासलाई अगाडि बढाउन मद्दत गर्न सक्छ।
यस अध्ययनको लागि उत्पन्न गरिएका डेटासेटहरू र परिणामस्वरूप विश्लेषणहरू सम्बन्धित लेखकबाट उचित अनुरोधमा उपलब्ध छन्। अध्ययनको अन्त्यमा, अध्ययनमा प्रयोग गरिएका सबै सामग्रीहरू (कीरा र बीउको खाना) नष्ट गरियो।