बिरुवा र रोगजनक सामग्रीहरू
इलिनोइस विश्वविद्यालय (अहिले UC डेभिसमा) मा डा. प्याट ब्राउनद्वारा ज्वार रूपान्तरण जनसंख्या (SCP) भनेर चिनिने ज्वार संघको नक्साङ्कन जनसंख्या डा. प्याट ब्राउनले प्रदान गरेका थिए। यो पहिले वर्णन गरिएको छ र अमेरिकी वातावरणमा बिरुवाहरूको वृद्धि र विकासलाई सहज बनाउन फोटोपिरियड-असंवेदनशीलता र सानो कदमा रूपान्तरित विविध रेखाहरूको संग्रह हो। यस अध्ययनमा यस जनसंख्याबाट ५१० रेखाहरू प्रयोग गरिएको थियो यद्यपि खराब अंकुरण र अन्य गुणस्तर नियन्त्रण समस्याहरूको कारणले गर्दा, सबै रेखाहरू तीनै विशेषताहरूको विश्लेषणमा प्रयोग गरिएको थिएन। अन्ततः ३४५ रेखाहरूबाट डेटा चिटिन प्रतिक्रियाको विश्लेषणको लागि, ४७२ रेखाहरू flg22 प्रतिक्रियाको लागि, र ४५६ TLS प्रतिरोधको लागि प्रयोग गरिएको थियो।ख. कुकीस्ट्रेन LSLP18 अर्कान्सास विश्वविद्यालयका डा. बर्ट ब्लुमबाट प्राप्त गरिएको थियो।
MAMP प्रतिक्रिया मापन
यस अध्ययनमा दुई फरक MAMP प्रयोग गरिएको थियो flg22, (Genscript catalog# RP19986), र chitin। ग्रीनहाउसमा माटोले भरिएको फ्ल्याटहरूमा राखिएको इन्सर्ट्समा ज्वारका बिरुवाहरू उब्जाइएको थियो (३३% सनशाइन रेडी-अर्थ प्रो ग्रोइङ मिक्स)। सङ्कलनको दिनमा पातहरूको अतिरिक्त ओसिलोपनबाट बच्न नमुना सङ्कलनको अघिल्लो दिन बिरुवाहरूलाई पानी हालिएको थियो।
लाइनहरू अनियमित रूपमा गरिएको थियो र, तार्किक कारणहरूले गर्दा, ६० लाइनहरूको ब्याचमा रोपिएको थियो। प्रत्येक लाइनको लागि, प्रति लाइन दुई बीउहरू सहित तीन 'भाँडा' रोपिएको थियो। सम्पूर्ण जनसंख्याको मूल्याङ्कन नभएसम्म अघिल्लो ब्याच प्रशोधन गरिसकेपछि पछिल्ला ब्याचहरू रोपिएको थियो। दुवै MAMP हरूको लागि दुई प्रयोगात्मक रनहरू सञ्चालन गरिएको थियो जसमा प्रत्येक दुई रनमा जीनोटाइपहरू पुन: अनियमित रूपमा गरिएको थियो।
पहिले वर्णन गरिए अनुसार ROS परीक्षणहरू गरियो। संक्षेपमा, प्रत्येक लाइनको लागि, ३ फरक भाँडामा छ वटा बीउ रोपिएको थियो। परिणामस्वरूप बिरुवाहरूबाट, एकरूपताको आधारमा तीनवटा छनोट गरिएको थियो। असामान्य देखिने वा धेरैजसो भन्दा उल्लेखनीय रूपमा अग्लो वा छोटो बिरुवाहरू प्रयोग गरिएन। तीन फरक १५-दिन पुरानो ज्वार बिरुवाहरूको चौथो पातको चौडा भागबाट ३ मिमी व्यासका चार पात डिस्कहरू निकालिएका थिए। दुई बिरुवाहरूबाट प्रति पात एक डिस्क र एउटा बिरुवाबाट दुई डिस्क, दोस्रो डिस्क पानी नियन्त्रण बन्यो (तल हेर्नुहोस्)। डिस्कहरूलाई कालो ९६-कुवा प्लेटमा ५० µl H20 मा व्यक्तिगत रूपमा तैराइएको थियो, प्रकाशको सम्पर्कबाट बच्न एल्युमिनियम सिलले बन्द गरिएको थियो, र रातभर कोठाको तापक्रममा राखिएको थियो। भोलिपल्ट बिहान २ मिलीग्राम/मिली केमिल्युमिनेसेन्ट प्रोब L-०१२ (वाको, क्याटलग # १२०-०४८९१), २ मिलीग्राम/मिली हर्सराडिश पेरोक्सिडेज (टाइप VI-A, सिग्मा-एल्ड्रिच, क्याटलग # P6782), र १०० मिलीग्राम/मिली चिटिन वा Flg22 को २ μM प्रयोग गरेर प्रतिक्रिया घोल बनाइयो। यस प्रतिक्रिया घोलको ५० μl चार मध्ये तीन इनारमा थपिएको थियो। चौथो इनार एउटा नक्कली नियन्त्रण थियो, जसमा MAMP बाहेक प्रतिक्रिया घोल थपिएको थियो। प्रत्येक प्लेटमा केवल पानी भएको चार खाली इनारहरू पनि समावेश गरिएको थियो।
प्रतिक्रिया घोल थपेपछि, SynergyTM 2 बहु-पत्ता लगाउने माइक्रोप्लेट रिडर (बायोटेक) प्रयोग गरेर १ घण्टाको लागि प्रत्येक २ मिनेटमा ल्युमिनेसेन्स मापन गरिएको थियो। प्लेट रिडरले यस १ घण्टाको अवधिमा प्रत्येक २ मिनेटमा ल्युमिनेसेन्स मापन लिन्छ। प्रत्येक इनारको लागि मान दिन सबै ३१ रिडिङहरूको योग गणना गरिएको थियो। प्रत्येक जीनोटाइपको लागि MAMP प्रतिक्रियाको अनुमानित मान (तीन प्रयोगात्मक इनारहरूको औसत ल्युमिनेसेन्स मान - नक्कली इनार मान) - औसत खाली इनार मान घटाएर गणना गरिएको थियो। खाली इनार मानहरू लगातार शून्यको नजिक थिए।
पात डिस्कहरूनिकोटियाना बेन्थामियानागुणस्तर नियन्त्रण उद्देश्यका लागि प्रत्येक ९६-वेल प्लेटमा नियन्त्रणको रूपमा एउटा उच्च प्रतिक्रियाशील सोर्घम लाइन (SC0003), र एउटा कम प्रतिक्रियाशील सोर्घम लाइन (PI 6069) पनि समावेश गरिएको थियो।
ख. कुकीटीकाकरणको तयारी र टीकाकरण
ख. कुकीपहिले वर्णन गरिए अनुसार इनोकुलम तयार पारिएको थियो। छोटकरीमा, ज्वारीको दानालाई तीन दिनसम्म पानीमा भिजाएर पखालियो, १ लिटर कोनिकल फ्लास्कमा स्कूप गरियो र १५ पीएसआई र १२१ डिग्री सेल्सियसमा एक घण्टाको लागि अटोक्लेभ गरियो। त्यसपछि अन्नहरूलाई ताजा कल्चरबाट लगभग ५ मिली म्यासेरेटेड माइसेलियाले इनोकुलेट गरियो।ख. कुकीLSLP18 लाई अलग्गै राखिन्छ र कोठाको तापक्रममा २ हप्ताको लागि छोडिन्छ, प्रत्येक ३ दिनमा फ्लास्कहरू हल्लाउँदै। २ हप्ता पछि, फंगसले संक्रमित ज्वारीको दानालाई हावामा सुकाइन्छ र त्यसपछि खेतमा टीकाकरण नभएसम्म ४ डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गरिन्छ। सम्पूर्ण परीक्षणको लागि उही टीकाकरण प्रयोग गरिन्छ र प्रत्येक वर्ष ताजा बनाइन्छ। टीकाकरणको लागि, ४-५ हप्ता पुरानो ज्वारीको बोटको घुमाउरोमा ६-१० संक्रमित अन्नहरू राखिन्छन्। यी फङ्गाबाट उत्पादित बीजाणुहरूले एक हप्ता भित्र जवान ज्वारीको बोटमा संक्रमण सुरु गर्छन्।
बीउ तयारी
खेतमा रोप्नु अघि ज्वारको बीउलाई ~ १% स्पाइराटो ४८० एफएस फङ्गिसाइड, ४% सेब्रिङ ४८० एफएस फङ्गिसाइड, ३% सोरप्रो ९४० ईएस बीउ सेफर भएको फङ्गिसाइड, कीटनाशक र सेफेनर मिश्रणले उपचार गरिएको थियो। त्यसपछि बीउलाई ३ दिनसम्म हावामा सुकाइयो जसले बीउ वरिपरि यो मिश्रणको पातलो आवरण प्रदान गर्यो। सेफेनरले उदगमपूर्व उपचारको रूपमा जडीबुटीको प्रयोगलाई डुअल म्याग्नमको अनुमति दियो।
लक्षित पातको दाग प्रतिरोधको मूल्याङ्कन
SCP जुन १४-१५ २०१७ र जुन २०, २०१८ मा क्लेटन, NC मा रहेको केन्द्रीय बाली अनुसन्धान केन्द्रमा प्रत्येक केसमा दुई प्रयोगात्मक प्रतिकृतिहरू सहितको अनियमित पूर्ण ब्लक डिजाइनमा रोपिएको थियो। प्रयोगहरू १.८ मिटर एकल पङ्क्तिहरूमा ०.९ मिटर पङ्क्ति चौडाइमा प्रति प्लट १० बीउ प्रयोग गरेर रोपिएका थिए। किनारा प्रभावहरू रोक्न प्रत्येक प्रयोगको परिधि वरिपरि दुई किनारा पङ्क्तिहरू रोपिएका थिए। प्रयोगहरू जुलाई २०, २०१७ र जुलाई २०, २०१८ मा खोप लगाइएको थियो जुन बिन्दुमा ज्वारका बिरुवाहरू वृद्धि चरण ३ मा थिए। मूल्याङ्कनहरू एक देखि नौ स्केलमा लिइएको थियो, जहाँ रोगको कुनै संकेत नदेखाउने बिरुवाहरूलाई नौको रूपमा स्कोर गरिएको थियो र पूर्ण रूपमा मरेका बिरुवाहरूलाई एकको रूपमा स्कोर गरिएको थियो। २०१७ मा दुई मूल्याङ्कनहरू लिइएको थियो र २०१८ मा चार रिडिङहरू प्रत्येक वर्ष खोप लगाएको दुई हप्ता पछि सुरु हुँदै। sAUDPC (रोग प्रगति वक्र अन्तर्गत मानकीकृत क्षेत्र) पहिले वर्णन गरिए अनुसार गणना गरिएको थियो।
पोस्ट समय: अप्रिल-०१-२०२१