बिरुवा र रोगजनक सामग्री
ज्वार रूपान्तरण जनसंख्या (SCP) भनेर चिनिने एक ज्वार संघ म्यापिङ जनसंख्या इलिनोइस विश्वविद्यालय (अहिले UC डेभिसमा) मा डा. प्याट ब्राउन द्वारा प्रदान गरिएको थियो।यो पहिले नै वर्णन गरिएको छ र अमेरिकी वातावरणमा बिरुवाहरूको वृद्धि र विकासलाई सहज बनाउन फोटोपेरियड-असंवेदनशीलता र सानो कदमा रूपान्तरित विविध रेखाहरूको संग्रह हो।यस अध्ययनमा यस जनसंख्याबाट 510 लाइनहरू प्रयोग गरिएको थियो यद्यपि खराब अंकुरण र अन्य गुणस्तर नियन्त्रण मुद्दाहरूको कारणले गर्दा, सबै रेखाहरू सबै तीन विशेषताहरूको विश्लेषणमा प्रयोग गरिएन।अन्ततः 345 रेखाहरूबाट डेटा chitin प्रतिक्रियाको विश्लेषणको लागि, 472 लाइनहरू flg22 प्रतिक्रियाको लागि, र 456 TLS प्रतिरोधको लागि प्रयोग गरियो।B. कुकीस्ट्रेन LSLP18 युनिभर्सिटी अफ अर्कान्सासका डा. बर्ट ब्लह्मबाट प्राप्त गरिएको थियो।
MAMP प्रतिक्रिया मापन
यस अध्ययन flg22, (Genscript catalog# RP19986), र chitin मा दुई फरक MAMPs प्रयोग गरिएको थियो।हरितगृहमा माटो (३३% सनसाइन रेडी-अर्थ प्रो ग्रोइङ मिक्स) भरिएको फ्ल्याटमा बिछ्याइएको इन्सर्टमा सोर्घमका बिरुवाहरू हुर्किन्थ्यो।संकलनको दिनमा अतिरिक्त पातको चिस्यानबाट बच्न नमूना सङ्कलन गर्नुभन्दा अघिल्लो दिन बिरुवाहरूलाई पानी हालिएको थियो।
लाइनहरू अनियमित थिए र, तार्किक कारणहरूका लागि, 60 लाइनहरूको ब्याचमा रोपिएका थिए।प्रत्येक लाइनको लागि, प्रत्येक लाइनमा दुईवटा बीउसहित तीन 'भाँडो' रोपिएको थियो।सम्पूर्ण जनसंख्याको मूल्याङ्कन नभएसम्म अघिल्लो ब्याचलाई प्रशोधन गरिसकेपछि पछिका ब्याचहरू रोपिएका थिए।दुईवटा प्रयोगात्मक रनहरू दुवै MAMP हरूको लागि जीनोटाइपहरू प्रत्येक दुई रनमा पुन: अनियमित गरिएको थियो।
आरओएस एसेसहरू पहिले वर्णन गरिए अनुसार गरिएको थियो।छोटकरीमा, प्रत्येक लाइनको लागि, 6 बीउहरू 3 फरक भाँडामा रोपिएको थियो।नतिजाको बिरुवाबाट, तीनवटा एकरूपताको आधारमा छनोट गरियो।असामान्य देखिने वा धेरै भन्दा अग्लो वा छोटो बिरुवाहरू प्रयोग गरिएन।३ मिलिमिटर व्यासको चारवटा पातको डिस्क तीनवटा विभिन्न १५ दिन पुरानो सोरमम बोटको चौथो पातको चौडा भागबाट निकालिएको थियो।दुईवटा बिरुवाबाट प्रति पातमा एउटा डिस्क र एउटा बिरुवाबाट दुईवटा डिस्क, दोस्रो डिस्क पानी नियन्त्रण हुने (तल हेर्नुहोस्)।डिस्कहरू व्यक्तिगत रूपमा कालो 96-वेल प्लेटमा 50 μl H20 मा तैरिएका थिए, प्रकाशको जोखिमबाट बच्न एल्युमिनियम सिलले बन्द गरी रातभर कोठाको तापक्रममा राखिएको थियो।भोलिपल्ट बिहान 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782), र प्रयोग गरी प्रतिक्रिया समाधान बनाइयो। 100 mg/ml Chitin वा Flg22 को 2 μM।यस प्रतिक्रिया समाधानको 50 μl चारवटा कुवाहरू मध्ये तीनमा थपियो।चौथो कुवा नक्कली नियन्त्रण थियो, जसमा MAMP बाहेक प्रतिक्रिया समाधान थपिएको थियो।प्रत्येक थालमा चारवटा खाली इनारहरू मात्रै राखिएका थिए।
प्रतिक्रिया समाधान थपेपछि, 1 घण्टाको लागि प्रत्येक 2 मिनेटमा SynergyTM 2 मल्टि-डिटेक्शन माइक्रोप्लेट रिडर (बायोटेक) को प्रयोग गरेर luminescence मापन गरियो।प्लेट रिडरले यस 1 घन्टाको अवधिमा प्रत्येक 2 मिनेटमा ल्युमिनेसेन्स मापन लिन्छ।सबै 31 पठनहरूको योगफल प्रत्येक इनारको मूल्य दिन गणना गरिएको थियो।प्रत्येक जीनोटाइपको लागि MAMP प्रतिक्रियाको लागि अनुमानित मान गणना गरिएको थियो (तीन प्रयोगात्मक कुवाहरूको औसत ल्युमिनेसेन्स मूल्य - नक्कली राम्रो मूल्य) - माइनस औसत खाली राम्रो मूल्य।खाली कुवा मानहरू लगातार शून्यको नजिक थिए।
को पात डिस्कनिकोटियाना बेन्थामियाना, एक उच्च उत्तरदायी ज्वार लाइन (SC0003), र एक कम प्रतिक्रियाशील ज्वार लाइन (PI 6069) पनि गुणस्तर नियन्त्रण उद्देश्यका लागि प्रत्येक 96-वेल प्लेटमा नियन्त्रणको रूपमा समावेश गरिएको थियो।
B. कुकीinoculum तयारी र टीका
B. कुकीinoculum पहिले वर्णन गरिए अनुसार तयार गरिएको थियो।छोटकरीमा भन्नुपर्दा, ज्वारको दानालाई तीन दिनसम्म पानीमा भिजाइयो, पखालियो, 1L कोनिकल फ्लास्कमा स्कूप गरियो र 15psi र 121 डिग्री सेल्सियसमा एक घण्टाको लागि अटोक्लेभ गरियो।त्यसपछि अनाजलाई ताजा संस्कृतिबाट करिब 5 मिलीलीटर म्यासेरेटेड माइसेलियाको साथ खोप लगाइयो।B. कुकीLSLP18 अलग हुन्छ र कोठाको तापक्रममा २ हप्ताको लागि छोडिन्छ, प्रत्येक ३ दिनमा फ्लास्क हल्लाउँदै।2 हप्ता पछि, फंगसले ग्रस्त ज्वारको दानालाई हावामा सुकाइन्छ र त्यसपछि 4 डिग्री सेन्टिग्रेडमा खेतमा खोप लगाउने समयसम्म भण्डारण गरिन्छ।एउटै इनोकुलम सम्पूर्ण परीक्षणको लागि प्रयोग गरियो र हरेक वर्ष ताजा बनाइयो।खोप लगाउनको लागि, 6-10 वटा संक्रमित दानाहरू 4-5 हप्ता पुरानो ज्वारको बोटमा राखिएको थियो।यी फङ्गाहरूबाट उत्पादन हुने बीजाणुहरूले एक हप्ता भित्र युवा जोवारको बोटमा संक्रमण सुरु गर्यो।
बीउ तयारी
जमिनमा रोप्नुअघि जोवारको बीउलाई ~ 1% Spirato 480 FS फुङ्गीसाइड, 4% Sebring 480 FS फङ्गीसाइड, 3% Sorpro 940 ES बीउ सेफनर भएको फङ्गिसाइड, कीटनाशक र सेफनर मिश्रणले प्रशोधन गरिएको थियो।त्यसपछि बीउहरू 3 दिनसम्म हावामा सुकाइयो जसले बीउ वरिपरि यो मिश्रणको पातलो कोटिंग प्रदान गर्यो।सेफनरले हर्बिसाइड डुअल म्याग्नमलाई पूर्व-उत्पत्ति उपचारको रूपमा प्रयोग गर्न अनुमति दियो।
लक्ष्य पात स्पट प्रतिरोध को मूल्याङ्कन
SCP जुन 14-15 2017 र जुन 20, 2018 मा क्लेटन, NC को केन्द्रीय बाली अनुसन्धान स्टेशनमा प्रत्येक केसमा दुई प्रयोगात्मक प्रतिकृतिहरू सहितको अनियमित पूर्ण ब्लक डिजाइनमा रोपिएको थियो।प्रयोगहरू 1.8 मिटर एकल पङ्क्तिमा 0.9 मिटर पङ्क्ति चौडाइमा प्रति प्लटमा 10 बीउ प्रयोग गरी रोपिएको थियो।किनारा प्रभावहरू रोक्न प्रत्येक प्रयोगको परिधिको वरिपरि दुई सीमाना पङ्क्तिहरू लगाइयो।प्रयोगहरू जुलाई 20, 2017 र जुलाई 20, 2018 मा टीका लगाइयो जुन बिन्दुमा ज्वार बिरुवाहरू वृद्धि चरण 3 मा थिए। मूल्याङ्कनहरू एक देखि नौ स्केलमा लिइयो, जहाँ रोगको कुनै लक्षण नदेखिने बिरुवाहरूलाई नौ र पूर्ण रूपमा अंकित गरिएको थियो। मृत बिरुवाहरू एकको रूपमा अंकित गरियो।2017 मा दुई मूल्याङ्कन लिइयो र 2018 मा चार रीडिंगहरू प्रत्येक वर्ष टीकाकरण पछि दुई हप्ता सुरु भयो।sAUDPC (रोग प्रगति वक्र अन्तर्गत मानकीकृत क्षेत्र) पहिले वर्णन गरिए अनुसार गणना गरिएको थियो।
पोस्ट समय: अप्रिल ०१-२०२१